Kinyouno dažymas: pamatas ir metodai

Kinyouno dažymas yra dažymo būdas, naudojamas bakterijų ir rūgštims atsparių parazitų dėmimui . Jis gimė iš Ziehl-Neelseno spalvos modifikavimo; Abu metodai yra interpretuojami vienodai, tačiau jie skiriasi dviem elementais: ruošiant pagrindinį reagentą ir tuo, kad Kinyoun technika nenaudoja šilumos.

Dėl šios priežasties jis taip pat žinomas kaip šaltai modifikuotas Ziehl-Neelsen arba Kinyoun šaltas dažymas. Jis skirtas Mycobacterium tuberculosis, Micobacterium leprae, netipinių mikobakterijų, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium muris ir Cyclosporas cayetanensis dažymui .

Verta paminėti, kad Nocardias ši technika labai silpnai dengia, nes jie yra iš dalies rūgščiai atsparūs alkoholiai, taigi šiam žanrui modifikuota metodika.

Savo ruožtu „Kinyoun“ šaltoji technika buvo derinama su trichromo technika, modifikuota Didiero, siekiant nustatyti kokcidijas ( Criptosporidium parvum ir Isospora belli ) ir mikrosporidijų sporas ( Enterocytozoon bieneusi ir Encephalitozoon intestinalis ).

Fondas

Pagrindinis dažymo reagentas yra karbolio fuchsinas arba fenicino fuksinas, turintis savybę, kad jis jungiasi su karbolio rūgštimis vaškinės ląstelės sienelėje, turtingoje mikobakterijų ir tam tikrų parazitų lipidais (mikolio rūgštimis).

Tokia sąjunga nėra neutralizuojama rūgštimi; todėl mikroorganizmai apibrėžiami kaip rūgštims atsparus alkoholis.

Skirtingai nei Ziehl-Neelsen technika, kuri fiksuoja dažus per šilumą, Kinyoun technikoje šis žingsnis nėra būtinas, nes šiam metodui paruoštas fenolio fuksino tirpalas turi didelę fenolio koncentraciją.

Fenolis ištirpina ląstelių sienelės lipidinę medžiagą, leidžiančią patekti į karbolio fuksino spalvą. Po dažų prasiskverbimo, jis lieka fiksuotas, nepaisant skalbimo su alkoholio rūgštimi.

Tokiu būdu atsparūs rūgštims atsparūs mikroorganizmai ima būdingą raudoną spalvą, o viskas, kas nėra atsparus rūgštims, tampa spalvos ir nusidažo mėlyna spalva.

Technika

Medžiagos

- Modifikuotas fenolio fuksinas.

- Alkoholio rūgštis.

- Mėlyna mėlyna.

Kinyoun fenicated fuchsin paruošimas

- Pagrindinė fuchsin: 4 gr.

- Fenolis: 8 ml.

- Alkoholis (95%): 20 ml.

- Distiliuotas vanduo: 100 ml.

Bazinis fuchsinas alkoholyje turi būti ištirpintas lėtai, nuolat maišant. Vėliau kristalizuotas fenolis ištirpinamas vandens vonioje 56 ° C temperatūroje. Ištirpinus, į pirmiau paruoštą tirpalą įpilama 8 ml.

Alkoholio rūgšties paruošimas

- Koncentruota druskos rūgštis: 3 ml.

- Etanolis (95%): 97 ml.

Jis turi būti matuojamas, sujungtas ir sumaišytas.

Metileno mėlynojo kontrastinio dažiklio paruošimas

- metileno mėlyna: 0, 3 g.

- Distiliuotas vanduo: 100 ml.

Jis sveria ir ištirpsta.

Kinyoun dėmių technika

1- Paruoškite tepinėlį tiesiai iš mėginio, kuris gali būti skrepliai, plaučių skystis, šlapimo nuosėdos, smegenų skystis arba išmatos; arba iš mikroorganizmų suspensijos, gautos iš grynų kolonijų, auginamų pirminės kultūros terpėje.

2 - Tvirtinkite tepinėlį su šiluma.

3 - Padėkite tepinėlį ant dažymo tilto ir uždenkite Kinyoun fenolio fuchsino reagentu. Leiskite jam pailsėti 3 ar 5 minutes.

4- Nuplaukite distiliuotu vandeniu.

5 - Balinimo su rūgštiniu alkoholiu 3 minutes ir nuplaukite distiliuotu vandeniu.

6 - Dar kartą balinti rūgštiniu alkoholiu 1 arba 2 minutes, kol nuvalys daugiau dažų.

7 - Nuplaukite distiliuotu vandeniu ir leiskite nusausinti, stumdami vertikaliai.

8- Uždenkite preparatą metileno mėlyną ir palikite 4 minutes.

9- Nuplaukite distiliuotu vandeniu ir išdžiovinkite.

10 - Patikrinkite esant 40X ir tada 100X.

Jei norite pagerinti ir pagreitinti rūgštinių mikroorganizmų dažymą, įpilkite 1 lašą drėkinamosios medžiagos (pvz., Tergitolio Nr. 7) į 30 arba 40 ml Kinouno feno rūgšties fuchsino.

Kai kurios laboratorijos keičia mėlynos spalvos kontrastinį dažiklį ryškiai žaliai arba pikininei rūgščiai; pirmoji fone suteikia žalią spalvą, o antroji - geltona spalva.

Kinyoun technika ypatinga Nocardias

Siekiant pagerinti Nocardia bakterijų dažymą, naudojamas Kinyouno dažymo modifikavimas. Technika yra tokia:

1 - Tris minutes uždenkite kvinono fenolio fuchsinu.

2 - Nuplaukite distiliuotu vandeniu.

3 - Trumpai užpurkškite 3% rūgštiniu alkoholiu, kol nebelieka dažų.

4- Nuplaukite distiliuotu vandeniu.

5- Uždenkite preparatą metileno mėlyną ir palikite 30 sekundžių.

6- Nuplaukite distiliuotu vandeniu ir išdžiovinkite.

Didžiojo modifikuotas fenolio ir trichrominio fuksino metodas

Šis metodas rekomenduojamas analizuojant išmatų mėginius, ieškant kokcidijų ir sporų „ Microsporidium sp “ tuo pačiu metu. Laikomasi tokios procedūros:

1 - 10 minučių dengia tepinėlį Kinyoun fenolio fuksinu.

2- Pašalinkite dažus ir nuplaukite distiliuotu vandeniu.

3 - Baliklis 30 sekundžių su alkoholio druskos rūgštimi.

4- Nuplaukite distiliuotu vandeniu.

5- Trikromo tirpalu užtepkite 30 minučių 37 ° C temperatūroje.

6 - Nuplaukite distiliuotu vandeniu.

7 - 10 sekundžių spalvos sumažinimas alkoholio acto rūgštimi.

8- Nuplaukite tepinėlį 30 sekundžių naudodami 95% etanolį.

Kokybės kontrolė

Kaip teigiama kontrolė, tepinėliai yra paruošiami su Mycobacterium tuberculosis padermėmis ir nudažyti paruoštais reagentais, siekiant įsitikinti, kad bakterijos yra tinkamos spalvos (raudonos fuksija).

Neigiami kontroliniai įtaisai taip pat gali būti naudojami ruošiant tepinėlį bet kokiu štamu, kuris yra atsparus rūgštingam alkoholiui, taip patvirtinant, kad visas mėginys atitinka kontrasto spalvą.

Kinyoun technika lyginant su Ziehl technika -Neelsen

Kinyoun technika yra paprastesnė, nes pašalina šildymo žingsnį, tačiau pagrindinis jo privalumas yra tai, kad jis neleidžia garams, labai toksiškiems ir sukelia vėžį ilgą laiką. Todėl Kinyouno dažymas yra saugesnis už dažymą atsakingam personalui.

Svarbu atsižvelgti į tai, kad būtina pasirūpinti, kad reagentai nepatektų tiesiogiai prie odos, nes jie yra ėsdinantys ir balinantis yra degus.

Kalbant apie trūkumus, neigiamas tepimas nebūtinai reiškia, kad mikroorganizmas nėra. Be to, ląstelių detritų buvimas gali sukelti klaidingus teigiamus rezultatus, kurie sukelia painiavą diagnozėje.

Nuoroda

1. Taikomoji klinikinė chemija (2016). „BK Kinyoun Kit“ galima įsigyti adresu: cromakit.es
2. Orozco-Rico Miguel. Kinyoun dėmės ir du Coccidia ŽIV. Medicinos žurnalas MD. 2011 m. 3 (2): 137
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A (2009). Mikrobiologinė Bailey & Scott diagnozė. 12 red. Argentina Redakcinė Panamericana SA
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologinė diagnostika. (5-asis red.). Argentina, Redakcijos Panamericana SA
5. Vikipedijos kūrėjai. «Kinyoun dėmės» Wikipedia, Free Encyclopedia . Wikipedia, „The Free Encyclopedia“, 2018 m. Vasario 8 d. 2019 m. Sausio 5 d.
6. Combol A, Fernández N, Figueredo E, Acuña A, Zanetta E. Spalvos technikos diegimas vienu metu diagnozuojant Coccidia ir Microsporidia. Respublikos universiteto Higienos institutas. Montevidėjas. Urugvajus Galima rasti adresu: higiene.edu.uy