Malonato sultinys: pagrindas, paruošimas ir naudojimas

Malonato sultinys yra skystos kultūros terpė, naudojama diagnostiniam tyrimui (malonato testas), naudojama skirtingoms Enterobacteriaceae šeimos gentims atskirti. Jį sukūrė Leifsonas 1933 m. Ir vėliau jį pakeitė Ewing, kuris pridėjo nedidelį kiekį dekstrozės ir mielių ekstrakto į pradinę formulę.

Šiuo metu terpę sudaro mielių ekstraktas, amonio sulfatas, dikalio fosfatas, monokalio fosfatas, natrio chloridas, natrio malonatas, dekstrozė ir bromtimolio mėlyna. Šis bandymas paprastai įtraukiamas į Enterobacteria biocheminio identifikavimo bateriją, padedant atskirti tam tikras gentis ir rūšis.

Malonato testas daugiausia grindžiamas kai kurių mikroorganizmų gebėjimu naudoti natrio malonatą kaip vienintelį anglies šaltinį ir amonio sulfatą kaip azoto šaltinį.

Malonato testas paprastai yra teigiamas kai kuriose Enterobacter, Klebsiella ir Citrobacter genties rūšyse. Nors dauguma genties Escherichia, Salmonella, Shigella, Edwardsiella, Yersinia, Serratia, Morganella, Proteus ir Providence rūšių yra neigiamos reakcijos.

Fondas

Malonato bandymas parodo tas bakterijas, kurios gali naudoti natrio malonatą kaip vienintelį anglies šaltinį ir amonio sulfatą kaip azoto šaltinį.

Didžioji dalis enterobakterijų, kurios nenaudoja malonato, gali augti šioje terpėje, vartodamos dekstrozės ir mielių ekstraktą kaip maistines medžiagas.

Tokiu atveju bet koks bandymas šarmuoti naudojant peptonus bus neutralizuotas rūgščių, susidarančių fermentuojant dekstrozę, gamybai. Panašiai dikalio ir monokalio fosfatai veikia kaip buferis, palaikantis pH 6, 7.

Štai kodėl, kai bandymas yra neigiamas, sultinys yra ta pati pradinė spalva (žalia). Retais atvejais terpė gali būti parūgštinta dėl dekstrozės fermentacijos; nenaudojant peptonų ir pH rodiklis paverstų terpės spalvą į geltoną. Kad tai įvyktų, pH turi nukristi iki 6.

Dabar, kai šis testas yra teigiamas, teigiama, kad mikroorganizmas, naudojant anglies ir azoto šaltinius, naudojo malonatą ir amonio sulfatą, nenaudodamas kitų komponentų.

Tokiu atveju terpė tampa šarminė dėl natrio išsiskyrimo ir dėl to susidariusio NaOH. Šiuo požiūriu pH rodiklis (bromtimolio mėlynas) paverčia spalvą iš žalios į mėlyną, kai pH yra lygus arba didesnis už 7, 6. Mėlyna gali būti aiški arba intensyvi (prūsų mėlyna).

Galiausiai natrio chloridas palaiko terpės osmoliškumą ir vanduo yra visų komponentų skiediklis.

Aiškinimas

Tokios pačios spalvos sultinys (žalias): neigiamas bandymas

Geltonasis sultinys: neigiamas testas

Šviesiai mėlynas arba intensyvus sultinys: teigiamas įrodymas

Yra variantas, vadinamas fenilalanino malonato sultiniu, taip pat vadinamas Shaw ir Clarke terpe. Šiuo atveju galima ištirti du bandymus, malonato naudojimą kaip anglies šaltinį ir piruvinės rūgšties gamybą iš fenilalanino.

Paruošimas

Malonato sultinys

Sveriamas pasirinkto komercinio namo įdėkle nurodytas gramų kiekis (jis gali skirtis). Sunkieji gramai suspenduojami vieno litro distiliuoto vandens. Šiek tiek šildykite, kol visiškai ištirps. 3 ml terpės paskirstoma 13/100 mėgintuvėlių su medvilniniu dangteliu.

Sterilizuokite autoklave 121 ° C temperatūroje 15 arba 20 minučių.

Prieš naudojimą atvėsinkite. Jei jie nebus vartojami nedelsiant, laikykite šaldytuve iki naudojimo. Prieš inokuliuokite kambario temperatūrą kambario temperatūroje.

Terpės pH turi būti 6, 7 ± 0, 2. Paruoštos terpės spalva yra žalios spalvos.

Fenilalanino malonato sultinys

Pasverkite 11 g dehidratuotos terpės ir ištirpinkite 1 litru distiliuoto vandens. Likusi preparato dalis yra tokia pati, kaip aprašyta aukščiau.

Jis taip pat gali būti paruoštas pridedant 2 g / l fenilalanino į malonato sultinio terpę prieš sterilizuojant.

Naudokite

Jis naudojamas kaip dalis biocheminių bandymų, kurie yra surenkami identifikuoti Enterobacteriaceae šeimos bakterijas.

Padėkite atskirti:

- Escherichia ir Serratia genties Klebsiella ir Enterobacter (+) gentys (-).

-Salmonella enterica ssp enterica ( -) rūšies Salmonella enterica ssp arizonae, Salmonella enterica ssp salame ir Salmonella enterica ssp diarizonae (+) rūšys.

- iš Klebsiella genties (+) iš genties Actinobacillus (-).

- Kartais tai gali padėti atskirti bakterijų, kurios nepriklauso Enterobacteriaceae šeimai, gentis ir rūšis, pvz., Tarp nefermentuojančių gramneigiamų bacilų Alcaligenes faecalis (+) ir Acinetobacter sp (-).

Procedūra

Pagal žiebtuvėlį imama dalis grynos kolonijos, naudojant tinkamai sterilizuotą ir atvėsintą platinos rankenėlę. Paimtas mėginys (lengvas inokuliatas) ištirpinamas malonato sultinyje. Jis inkubuojamas su laisvu dangčiu aerobioze esant 35 ° C ± 0, 2 ° C 24–48 valandoms.

Malonato sultinys taip pat gali būti inokuliuojamas iš 18–24 valandų kultūros triptozės sojos sultinyje. Šiuo atveju 0, 01 ml yra paimama steriliu pipete, o malonato sultinys yra užkrėstas. Jis inkubuojamas su laisvu dangčiu aerobioze esant 35 ° C ± 0, 2 ° C 24–48 valandoms.

Pasibaigus rezultatams, rezultatai interpretuojami. Visi mėlynos spalvos pėdsakai, pasibaigę po 48 valandų inkubacijos, turėtų būti laikomi teigiamais. Bandymas neturėtų būti aiškinamas kaip neigiamas, kol nebebus baigtas 48 valandų inkubacinis laikas.

Naudojant fenilalanino malonato sultinio variantą, malonatas pirmą kartą interpretuojamas, po to pridedama 5 lašai 1N HCL ir 3-5 lašų geležies chlorido 8%. Tamsiai žalia spalva aiškinama kaip teigiamas fenilalanino testas. Kita vertus, jei terpė tampa šviesiai mėlyna, bandymas yra neigiamas fenilalaninui.

Kokybės kontrolė

Norint atlikti terpės sterilumo kontrolę, vienas ar du sultiniai turi būti inkubuojami 35 ° C ± 0, 2 temperatūroje 24 valandas inkubuojant. Šio laiko pabaigoje neturėtų būti drumstumo, spalvos pokyčių.

Kokybės kontrolei gali būti naudojami žinomi arba sertifikuoti kamienai, tokie kaip: Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 33945, Salmonella enterica ssp arizonae ATCC 13314 ir Escherichia coli ATCC 25922.

Laukiami rezultatai yra:

Enterobacter aerogenes, Klebsiella pneumoniae ir Salmonella enterica ssp arizonae suteikia teigiamą reakciją (vidutiniškai mėlyna spalva).
Escherichia coli atveju rezultatas turi būti neigiamas, ty tikimasi, kad spalvos (žalios) nesikeis arba dėl gliukozės fermentacijos jis tampa geltonas.